導(dǎo)讀：仿制藥研發(fā)領(lǐng)域，起始原料選擇尤為重要。

 

1.綜述

 

鹽酸莫西沙星是拜耳公司開發(fā)的第四代新型8-甲氧基氟喹諾酮類抗菌藥物，具有抗菌譜廣、抗菌力強(qiáng)、交叉耐藥少、光毒性低、藥物相互作用少、生物利用度高、組織穿透力好等特點。最早于1999年6月在德國獲批上市，并于2002年8月獲批進(jìn)口中國。截至2011年5月，鹽酸莫西沙星片已在包括上述國家在內(nèi)的127個國家和地區(qū)獲得批準(zhǔn)。

 

鹽酸莫西沙星結(jié)構(gòu)如下：
 

 

鹽酸莫西沙星合成工藝路線如下：
 

從結(jié)構(gòu)來看主要由兩個片段組成，片段一為(S,S)-2,8-二氮雜二環(huán)[4,3,0]壬烷（CAS：151213-40-0），作為本品合成的起始原料之一；合成路線如下：
 

 

片段二為8-甲氧基氟喹諾酮類結(jié)構(gòu)，以1-環(huán)丙基-6,7-二氟-1,4-二氫-8甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯（CAS：112811-71-9）起始原料反應(yīng)制得，其合成路線如下：
 

 

2.起始原料選擇依據(jù)

 

在原料藥研究DMF備案中，起始原料選擇依據(jù)尤為重要，會影響到API注冊的風(fēng)險，依據(jù)ICHQ11原則，確定起始原料，如下：

 

1）起始原料A和B為原料藥API關(guān)鍵結(jié)構(gòu)片段，可以通過有效手段進(jìn)行鑒別。

 

2）兩個起始原料A和B質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)合理建立，相關(guān)雜質(zhì)的控制及限度制定依據(jù)合理，滿足可持續(xù)生產(chǎn)出合格原料藥。

 

3）原料藥有手性中心引入是來源于起始原料A和B，其中異構(gòu)體雜質(zhì)的控制可優(yōu)先采取源頭控制策略。

 

4）對原料藥藥典規(guī)定的雜質(zhì)，需確定其產(chǎn)生機(jī)理，并對產(chǎn)生該雜質(zhì)的源頭進(jìn)行合理控制，加標(biāo)確定合適的質(zhì)控限度，確保生產(chǎn)的原料藥符合要求。

 

5）工藝路線一般要求工藝路線要求至少3步化學(xué)鍵合反應(yīng)，在滿足注冊要求的前提下，確保起始原料選擇的合理性。

 

6）對于外購原料A和B，嚴(yán)格按供應(yīng)商確認(rèn)程序進(jìn)行審計和資質(zhì)確認(rèn)，要求供應(yīng)商對起始原料質(zhì)量可能產(chǎn)生影響的任何工藝變更及時通知申報方，降低未來工藝變更可能對原料藥質(zhì)量造成影響的風(fēng)險，并定期對供應(yīng)商進(jìn)行全面的質(zhì)量審計，保證其生產(chǎn)的原料持續(xù)符合質(zhì)量要求。

 

選擇起始原料應(yīng)考慮上述全部原則，而不是孤立的嚴(yán)格遵循單個原則。

 

3.起始原料分析方法建立關(guān)鍵點

 

3.1起始原料：(S,S)-2,8-二氮雜二環(huán)[4,3,0]壬烷

 

3.1.1雜質(zhì)分析
 

 

 

3.1.2研究思路
 

1）有關(guān)物質(zhì)方法：主要檢測雜質(zhì)-0B、雜質(zhì)-0C、雜質(zhì)-0D與未知雜質(zhì)，采用HPLC法。

 

2）有關(guān)物質(zhì)方法Ⅱ：主要檢測雜質(zhì)-0F與雜質(zhì)-0H，此兩雜質(zhì)在有關(guān)物質(zhì)條件下出峰較早，干擾測定，單建方法進(jìn)行檢測。其中雜質(zhì)-0F與雜質(zhì)-0H極性極大，采用常規(guī)C18色譜柱基本沒有保留；雜質(zhì)-0F與雜質(zhì)-0H結(jié)構(gòu)中均含有N原子，在酸性的流動相條件下，這兩個化合物帶正電荷，此時采用含有庚烷磺酸鈉的流動相時，帶正電的兩個化合物會和帶負(fù)電的庚烷磺酸鈉基團(tuán)形成靜電作用，從而保留增強(qiáng)。

 

3）異構(gòu)體：雜質(zhì)-0A為對映異構(gòu)體，采用柱前手性衍生試劑GITC進(jìn)行衍生方法檢測。

 

4）雜質(zhì)-0G：采用陽離子交換色譜柱進(jìn)行檢測；

 

5）雜質(zhì)-0E：為酒石酸，采用HPLC法進(jìn)行檢測。

 

3.1.3 檢測方法優(yōu)化思路

 

流動相加入離子對試劑庚烷磺酸鈉時，離子對試劑極易吸附在普通色譜柱填料的活性位點上，難以洗脫下來，導(dǎo)致色譜柱死體積增加，保留時間提前，理論塔板數(shù)降低，分離度變差的情況，這個吸附過程是不可逆的，因此在選擇色譜柱的時候需要格外注意。選擇島津Shim-packScepterC18色譜柱，此款色譜柱采用新開發(fā)的有機(jī)硅烷層與無機(jī)硅烷層多層結(jié)構(gòu)的混合型顆粒，既保持了無機(jī)硅烷的高機(jī)械強(qiáng)度，也極大的提高了強(qiáng)酸堿的耐受性（pH1.0~12.0）。同時運(yùn)用微反應(yīng)器造粒技術(shù)和多級端基封尾技術(shù)，保證了可以長期耐受離子對試劑流動相。

 

分析方法：

 

色譜柱：Shim-packScepterC18-120（5μm，4.6×250mm）PN：227-31020-06；SN：106YA80292

 

柱溫30℃；檢測波長210nm；流速1ml/min；進(jìn)樣量20μl；供試品濃度：1mg/min；

 

流動相A：0.02mol庚烷磺酸鈉溶液（磷酸調(diào)pH至2.9）

 

流動相B：乙腈

 

稀釋劑：流動相A

 

梯度洗脫程序：
 

 

說明：色譜圖從上到下依次為雜質(zhì)E和雜質(zhì)F混合溶液、空白、其他雜質(zhì)混合溶液、供試品溶液。

 

結(jié)果：空白、其他雜質(zhì)均不干擾檢測；供試品中未檢出雜質(zhì)E和F。

 

3.2起始原料：1-環(huán)丙基-6,7-二氟-1,4-二氫-8甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯

 

3.2.1雜質(zhì)分析
 

 

3.2.2研究思路

 

1）有關(guān)物質(zhì)方法：主要檢測雜質(zhì)-1A、雜質(zhì)-1B、雜質(zhì)-1C、雜質(zhì)-1D、雜質(zhì)-1F、雜質(zhì)-1H、雜質(zhì)-1L與未知雜質(zhì)。

 

2）有關(guān)物質(zhì)方法Ⅱ：主要檢測雜質(zhì)-1M與雜質(zhì)-1I；雜質(zhì)MXC-1M在原有關(guān)物質(zhì)條件下靈敏度不符合要求，雜質(zhì)MXC-1I與主峰重合，另新建方法進(jìn)行研究。

 

3）有關(guān)物質(zhì)方法Ⅲ：主要檢測雜質(zhì)-1K，該雜質(zhì)紫外吸收較弱，采用GC-MS進(jìn)行研究，在后續(xù)步驟中控制。

 

4）有關(guān)物質(zhì)方法Ⅳ：主要檢測雜質(zhì)-1J，為致突變雜質(zhì)，紫外吸收較弱，結(jié)構(gòu)中有醛基，采用2,4-二硝基苯肼衍生進(jìn)行研究。

 

5）有關(guān)物質(zhì)方法Ⅴ：主要檢測雜質(zhì)-1G和雜質(zhì)-1O，均為致突變雜質(zhì)，靈敏度較低，單獨(dú)進(jìn)行研究。

 

6）有關(guān)物質(zhì)方法Ⅵ：主要檢測雜質(zhì)-1E，為致突變雜質(zhì)，采用GC方法單獨(dú)進(jìn)行研究。

 

3.2.3 檢測方法優(yōu)化思路

 

由于目標(biāo)物結(jié)構(gòu)類似，極性差異小，需要選擇島津Shim-packScepterHD-C18色譜柱進(jìn)行分離，Shim-packScepterHD-C18填料為為聚合型鍵合，立體選擇性較強(qiáng)，適合分離結(jié)構(gòu)類似的化合物。

 

分析條件：

 

色譜柱：Shim-packScepterHD-C18-80（5μm,4.6×250mm）PN：227-31024-06；SN：127YA90057

 

柱溫40℃；檢測波長220nm；流速1ml/min；進(jìn)樣量20μl；供試品濃度：1mg/min

 

流動相A：0.02mol磷酸二氫鉀溶液

 

流動相B：甲醇-乙腈（70:30）

 

稀釋劑：0.2%磷酸-甲醇（45：55）溶液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH至6.3）

 

梯度洗脫程序：
 

系統(tǒng)適用性溶液

 

出峰順序：雜質(zhì)A、雜質(zhì)L、雜質(zhì)B、雜質(zhì)D、雜質(zhì)C、雜質(zhì)F（雜質(zhì)I）、主峰、雜質(zhì)G（雜質(zhì)N）、雜質(zhì)H、雜質(zhì)M。

 

說明：峰8和峰7（主峰）的分離度大于1.5，其他雜質(zhì)不干擾主峰且和主峰的分離度大于1.5。

 

4.寄語

 

在仿制藥研發(fā)領(lǐng)域，起始原料選擇尤為重要，需參考ICHQ11制定合理的起始原料選擇依據(jù)，有助于減少返補(bǔ)風(fēng)險；對于雜質(zhì)研究，選擇合理的控制策略，有助于注冊風(fēng)險的降低；對于分析方法的建立，從各雜質(zhì)結(jié)構(gòu)分析，分批合理制定雜質(zhì)研究思路；對于特殊的雜質(zhì)研究，選擇合理的色譜條件及色譜柱，能有助于快速開發(fā)出合理的檢測方法。
 

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關(guān)于我們：
 

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